純化抗體效價測定法

    1、當抗體濃度在5mg/ml以上，可用免疫雙相擴散法測定抗體效價。

    2、當抗體濃度低于3mg/ml時，或者對應抗原為小分子（如生物素，地高辛等）時必須用ELISA法測定抗體活性，同上步驟。

操作步驟如下：

1、1%離子瓊脂配制及倒板：

    稱1g瓊脂糖或日本瓊脂粉，加入100ml 0.05U pH8.6巴比妥-HCL緩沖液中，水浴下加熱至完全融化，取3ml倒在普通載玻片上（2.5×7cm）,待凝膠凝固后，放4℃存放20min以上可打孔使用。

    待用瓊脂凝膠加入20mg NaN₃,混勻后3ml-分裝于4℃保存備用。

2、打孔加樣。

    用3mm打孔器打孔，孔徑3mm，孔距3～5mm的梅花瓣孔圖。注意不要把孔打裂，及漏底現象。

    當測抗體效價或活性時，抗體對倍稀釋后加在四周孔，抗原加在中間孔，每孔10μl。

    各種IgG抗體，對應抗原可用正常血清1:40～50PBS稀釋作抗原。

3、結果觀察

加好樣品的雙擴板，放37℃溫箱24～48小時，觀察結果，**對著日光燈觀察。**稀

釋度抗體孔的沉淀線為抗體效價或活性。

瓊脂雙相擴散圖

沉淀線隨著抗體的稀釋，逐漸靠近抗體孔邊。

（五）單相免疫擴散法：參考“現代免疫化學技術”第185～187頁

（六）免疫電泳法：參考“現代免疫化學技術”第52～62頁

（七）免疫印跡技術參考“現代免疫化學技術”第83～87頁。

（八）純化抗體及免疫球蛋白IgG 的定量均采用紫外吸收公式計算   

                                                       IgG（或純化抗體IgG）mg/ml=×稀釋倍數

IgG消光系數=1cm光程，1mg/ml濃度0.01mol/L pH7.2PBS的OD吸收值。

不同血清IgG的消光系數為：羊IgG：1.30,兔IgG：1.35,人IgG：1.38,小鼠IgG：1.46,

大鼠IgG：1.45,馬 IgG：1.50,豬 IgG：1.42,狗 IgG：1.58,雞 IgG：1.77