實驗室常用貯存液的配制(1)1 . 30% 丙烯酰胺溶液 【配制方法】將 29g 丙烯酰胺和 1g N , N ’ - 亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 60ml 的水中。加熱至 37 ℃ 溶解之, 補加水至終體積為 100ml 。用 Nalgene 濾器( 0.45 μ m 孔徑)過濾除菌,查證該溶液的 pH 值應不大于 7.0 ,置棕色 瓶 中保存于室溫。 【注意】丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰 胺時應戴手套和面具??烧J為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格 較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約 0.2 體積的單床混合樹脂( M B- 1Mallinckrodt ),攪拌過夜,然后用 Whatman 1 號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢 轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。
2 . 40% 丙烯酰胺 【配制方法】把 380g 丙烯酰胺( DNA 測序級)和 20g N , N ’ - 亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 600ml 的蒸餾水 中 。 繼續按上述配制 30% 丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為 1L 。 【注意】見上述配制 30% 丙烯酰胺的說明, 40% 丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列測定。
3 .放線菌素 D 溶液 【配制方法】把 20mg 放線菌素 D 溶解于 4ml 100% 乙醇中, 1 : 10 稀釋貯存液,用 100% 乙醇作空白對照讀取 OD440 值。放線菌素 D (分子量為 1255 )純品在水溶液中的摩爾消化系數為 21 , 900 ,故而 1mg/ml 的放線菌素 D 溶液在 440nm 處的吸光值為 0.182 ,放線菌素 D 的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于 -20 ℃ 。 【注意】放線菌素 D 是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內操作,而不能在開放在實驗 桌 面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。 藥廠提供的作治療用途的放線菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在 440nm 波長處的光 吸收確定放線菌素 D 的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導作用。
4 . 0.1mol/L 腺苷三磷酸( ATP )溶液 【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 調至 pH 值至 7.0 ,用蒸餾水定容 1ml ,分裝成小 份保存于 -70 ℃
5 . 10mol/L 乙酸酰溶液 【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后過濾除菌。
6 . 10% 過硫酸銨溶液 【配制方法】把 1g 過硫酸銨溶解于終量為 10ml 的水溶液中,該溶液可在 4 ℃ 保存數周。
7 . BCIP 溶液 【配制方法】把 0.5g 的 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚磷酸二鈉鹽( BCIP )溶解于 10ml 100% 的二甲基甲酰胺中,保存于 4 ℃
8 . 2 × BES 緩沖鹽溶液 【配制方法】用總體積 90ml 的蒸餾水溶解 1.07g 鹽溶液 BES[N , N- 雙( 2- 羥乙基) -2- 氨基乙磺酸 ] 、 1.6g NaC l 和 0.027g Na2HPO4 ,室溫下用 HCl 調節 該溶液的 pH 值至 6.96 、然后加入蒸餾水定容至 100ml ,用 0.22 μ m 濾器 過濾除菌,分裝成小份,保存于 -20 ℃ 。
9 . 1mol/L CaCl2 溶液 【配制方法】在 200ml 蒸餾水中溶解 54g CaCl2?6H2O ,用 0.22 μ m 濾器過濾除菌,分裝成 10ml 小份貯存于 -2 0 ℃ 。 【注意】制備感受態細胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至 100ml ,用 Nalgene 濾器( 0.45 μ m 孔徑)過 濾 除菌,然后驟冷至 0 ℃ 。 |